2.4 方法学验证

2.4.1 线性方程、电感等离的种线性范围与检出限

按1.2仪器工作条件测定1.3.2配制的耦合系列标准工作溶液，以各元素的体质每秒计数（CPS）与内标元素CPS的比值（y）为纵坐标，以标准溶液质量浓度（x，谱法μg/L）为横坐标绘制标准工作曲线，测定线性回归计算得7种元素的阿莫线性方程。7种元素的西林线性方程，线性范围和相关系数见表1。原料药中元素各元素相关系数为0.9997～1.0000，杂质说明线性关系良好。电感等离的种

11次测定标准空白溶液得到各元素的耦合CPS，计算11次CPS的体质标准偏差（SD），以3SD对应样品中待测元素含量为方法的谱法检出限（LOD），计算得V、测定Co、阿莫Ni、As、Cd、Pb、Hg方法检出限分别为0.0010、0.0015、0.0060、0.0054、0.0040、0.0024、0.0052mg/kg。

定量限浓度要满足准确度的要求，意味着必须对定量限浓度进行加标回收试验验证。定量限浓度设置为线性最低点，7种元素的定量限均为0.1mg/kg，经加标回收试验验证，能满足准确度的要求。

2.4.2 准确度试验

采用加标溶液的回收率来评价方法的准确度。精密称取12份阿莫西林样品，分为3组，分别作为低、中、高浓度的加标样品，平行样品数分别为3、6、3份，加入适量多元素标准溶液，使其最终溶液中各元素质量浓度均分别为0.5、5、50μg/L；另取12份样品，加入适量Hg标准溶液，使其最终溶液中元素质量浓度分别为0.5、2、5μg/L；按实验方法测定，结果见表2。

由表2可知，在3个浓度加标水平下，7种元素的平均回收率为86.1%～130.9%，均在70%～150%之间，满足准确度要求。

2.4.3 重复性试验

重复性试验由加标回收试验中间浓度的6次平行测定结果来评估，以各元素实际测定值的相对标准偏差表示，结果见表3。由表3可知，V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg测定结果的相对标准偏差分别为2.0%、1.6%、2.0%、2.6%、2.5%、1.5%、4.5%，均小于20%，满足方法重复性要求。

2.4.4 中间精密度试验

中间精密度由准确度实验中所使用的中间浓度加标溶液来评估，由2名分析人员在不同的时间各自独立测试6份加标样品，以12份样品中各元素实际测定值的相对标准偏差表示。V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg测定值的相对标准偏差分别为2.2%、1.3%、3.2%、4.6%、5.7%、4.9%、6.3%，均小于25%，满足中间精密度要求。

2.5 实际样品测定

按上述建立的方法，测定了3批阿莫西林样品中的7种元素杂质，结果表明，各批次阿莫西林样品中7种元素杂质的含量均低于定量限，说明其安全风险较小。

3 结论

（1）建立了ICP–MS方法测定阿莫西林原料药中V、Co、Ni、As、Cd、Hg和Pb7种杂质元素含量的方法。方法学验证表明该方法准确度与精密度良好。

（2）采用2%硝酸溶解样品的样品前处理方法，与微波消解等消解方法相比，操作简便、省时、快速，能够节省试剂使用量、同时也减少样品消解过程带来的本底、试剂污染。

（3）该方法可为阿莫西林原料药中7种杂质元素的质量控制、原料药中元素杂质分析方法的建立与评价提供参考。

（4）样品处理方法的优化过程中发现，溶液中的有机成分会增加As元素在等离子体中的电离，导致回收率变大，在原料药元素杂质分析方法开发过程中应该优化出合适的取样量。

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